CCK8試劑盒（增強(qiáng)型）簡(jiǎn)稱(chēng)CCK8試劑盒，是一種基于WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。

CCK8工作原理：在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物（formazan）。顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比，與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定OD值，間接反映活細(xì)胞數(shù)量。

CCK8是MTT的一種升級(jí)替代產(chǎn)品，和MTT或其它MTT類(lèi)似產(chǎn)品如XTT、MTS等相比有明顯的優(yōu)點(diǎn)。首先，MTT被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液來(lái)溶解；而CCK8和XTT、MTS產(chǎn)生的formazan都是水溶性的，可以省去后續(xù)的溶解步驟。其次，CCK8產(chǎn)生的formazan比XTT和MTS產(chǎn)生的formazan更易溶解。再次，CCK8比XTT和MTS更加穩(wěn)定，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加穩(wěn)定。另外，CCK8和MTT、XTT等相比線性范圍更寬，靈敏度更高。

CCK8應(yīng)用非常廣泛，如藥物篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、腫瘤藥敏試驗(yàn)以及生物因子的活性檢測(cè)等。

使用方法

     一、細(xì)胞活性檢測(cè)

注意：如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK8之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。

1.在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）。

2.向每孔加入10μLCCK8溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）。

3.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4h。

4.用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。

5.若暫時(shí)不測(cè)定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCl溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下，24h內(nèi)測(cè)定，吸光度不會(huì)發(fā)生變化。

二、細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)

1.在96孔板中配置100μL的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24h（37℃，5%CO2）。

2.向培養(yǎng)板加入1-10μL不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。

3.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（例如：6、12、24或48h）。

4.向每孔加入10μLCCK8溶液（注意不要再孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）。

5.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4h。

6.用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。

7.若暫時(shí)不測(cè)定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCl溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24h內(nèi)測(cè)定，吸光度不會(huì)發(fā)生變化。